以吉非替尼为代表的酪氨酸激酶抑制剂，是临床最为成功的晚期肺癌靶向治疗药物，通过抑制EGFR酪氨酸激酶或抑制肿瘤生长。非小细胞肺癌患者EGFR基因上18/19/20/21外显子上的突变与吉非替尼等酪氨酸激酶抑制剂的疗效显著相关。因此，美国国立综合癌症网络（NCCN）指南和中国卫生部公布的抗肿瘤药物临床应用指导原则均规定，酪氨酸激酶抑制剂前要先对患者EGFR基因的突变情况进行检测，根据突变检测结果制定个体化的靶向药物治疗方案。
本发明开发了EGFR C797S、EGFR T790M、EGFR L858R和EGFR 19外显子缺失等共8个EGFR热点突变位点的检测试剂盒，试剂盒的扩增灵敏度为1-10 拷贝/反应，突变检测灵敏度为1‰-0.1‰，且可通过标准曲线的方式进行定量。可以实现对血浆和组织中EGFR突变进行定量检测。

一、EGFR基因突变检测的临床意义
以吉非替尼为代表的酪氨酸激酶抑制剂，是临床最为成功的晚期肺癌靶向治疗药物，通过抑制EGFR酪氨酸激酶或抑制肿瘤生长。非小细胞肺癌患者EGFR基因上18/19/20/21外显子上的突变与吉非替尼等酪氨酸激酶抑制剂的疗效显著相关。因此，美国国立综合癌症网络（NCCN）指南和中国卫生部公布的抗肿瘤药物临床应用指导原则均规定，酪氨酸激酶抑制剂前要先对患者EGFR基因的突变情况进行检测，根据突变检测结果制定个体化的靶向药物治疗方案。
二、现有EGFR基因检测试剂盒现状
组织中的EGFR突变含量丰富，大部分突变检测方法只要特异性能大于1%，就能实现对组织中的EGFR突变检测。但是，EGFR的突变在血液中含量很低（约几十拷贝），且与大量野生型DNA共存（≤0.1%）。野生型DNA的干扰就要求血浆EGFR突变检测方法必须具有很高的灵敏度与特异性，能够从大量的野生型DNA中扩增和检测出微量的突变型EGFR。因此，理想的血浆EGFR突变检测方法需要具有高敏度和高特异性可定量的特点。常用的血浆EGFR突变检测方法有Sanger测序法（特异性>10%），ARMS PCR（特异性1%左右），数字化PCR（特异性< 0.1%），二代测序技术（特异性0.1-1%）等，这些方法要么特异性难以满足血浆EGFR突变的检测需求（Sanger测序法，ARMS PCR），要么仪器试剂成本高且操作复杂（数字化PCR和二代测序技术），因此临床依然缺乏一种高灵敏、高特异、可定量、简单、低成本的血浆EGFR突变检测方法。
三、本发明的主要内容
本发明基于双重PNA钳制反应介导的LNA-PNA钳制PCR技术（LNA-dPNA PCR clamp），开发了EGFR C797S、EGFR T790M、EGFR L858R和EGFR 19外显子缺失等共8个EGFR热点突变位点的检测试剂盒，试剂盒的扩增灵敏度为1-10 拷贝/反应，突变检测灵敏度为1‰-0.1‰，且可通过标准曲线的方法进行定量。可以实现对血浆和组织中EGFR突变进行定量检测。此外，该试剂盒只需要普通实时荧光PCR仪器，且在3小时内就能得到检测结果，试剂成本低，可实现对样品的快速、低成本检测。